ساخت سازه ی خاموشی ژن سوکروز سنتاز1 (pasus1) به منظور ارتقاء مقاومت گوجه فرنگی به گل جالیز مصری (phelipanche aegyptica)

گل جالیز((phelipanche spp. گیاه انگلی مطلق بوده که به ریشه ی بسیاری از گیاهان زراعی مهم همچون گوجه فرنگی، آفتابگردان، خیار، توتون و غیره حمله کرده و باعث کاهش قابل توجهی در عملکرد گیاه زراعی به ویژه در مناطق خشک و گرم همچون اروپا، آفریقا و آسیا می شود. تاکنون روش های متعددی برای کنترل گل جالیز استفاده شده است، اما عموماً این روش ها گران بوده و موثر عمل نمی کنند. به تازگی اهمیت ژن سوکروز سنتاز1 (prsus1) و نقش آن در مسیر سنتز سلولز در گل جالیز (phelipanche ramosa) به اثبات رسیده است.در این مطالعه سازه خاموشی ژن سوکروز سنتاز1 گل جالیز مصری (phelipanche aegyptica) با هدف ارتقاء مقاومت گوجه فرنگی از طریق استفاده از سیستم خاموشی گوجه فرنگی برای تحریک خاموشی این ژن در گل جالیز، ساخته شد. با این هدف، ابتدا قطعه 918 جفت بازی از سمت 5 پریم ژن سوکروز سنتاز1 گل جالیز مصری با استفاده از طراحی آغازگر های بر مبنای توالی های موجود در پایگاه (http://ppgp.huck.psu.edu)، همسانه سازی و توالی یابی شد. سپس بر مبنای این توالی، آغازگرهایی برای تکثیر ناحیه 335 جفت بازی مورد استفاده در پلاسمید خاموشی، طراحی شد. آغازگر رفت دارای جایگاه شناسایی آنزیم های برشی bamhi و xhoi و آغازگر برگشت دارای جایگاه ecori و hindiii بود. قطعه تکثیر شده با آغازگر های مذکور، در یک مرحله با برش دوگانه با آنزیم های xhoi و ecori در پلاسمید خاموشی phannibal در جهت سنس برای ساخت پلاسمید phannsus قرار داده شد. در مرحله بعد پس ار برش دوگانه پلاسمید phannsus و قطعه 335 جفت بازی با آنزیم های bamhi و hindiii این قطعه در جهت آنتی سنس در پلاسمید phannsus قرار داده شد و پلاسمید phannsusmute ساخته شد. در پایان پس از تک برش دو پلاسمید phannsusmute و پلاسمید دوگانه part27 با استفاده آنزیم noti، کاست خاموشی 3574 نوکلئوتیدی برای ساخت سازه خاموشی دوگانه ی partsusmute، به پلاسمید part27 متصل شد.